摘  要本文介紹了用反相高效液相色譜—紫外檢測器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量，測定飲料、醬油、食醋、辣醬等食品中對羥基苯甲酸酯類含量，該測定方法具有可操作性、廣泛的應(yīng)用性和較高的準(zhǔn)確性。
    關(guān)鍵詞 高效液相色譜法 對羥基苯甲酸酯類 外標(biāo)法

   對羥基苯甲酸酯即尼泊金酯，主要品種有對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，是新一代消毒殺菌防腐劑，它具有低毒、高效、用量少等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛地應(yīng)用于飲料、醬油、食醋、化妝品和醫(yī)藥等方面。目前，測定對羥基苯甲酸酯類含量的方法是依據(jù)GB/T5009.31-2003制定的。該方法較為繁瑣、費(fèi)時(shí)，且樣品處理不當(dāng)，對羥基苯甲酸酯就不能被完全提取，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，該方法采用氣相色譜法，儀器條件較難掌握，尤其在無自動(dòng)進(jìn)樣器的條件下，因此同樣影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。筆者用反相高效液相色譜—紫外檢測器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量，測定飲料、醬油、食醋、辣醬等食品中對羥基苯甲酸酯，方法回收率范圍為97.4%～101.3％，結(jié)果令人滿意。在2006年長三角地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品食品檢驗(yàn)?zāi)芰Ρ葘υ囼?yàn)活動(dòng)中，采用該方法檢測對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯，獲得滿意結(jié)論。

    1.實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 方法

     試樣中對羥基苯甲酸酯用乙醇提取，經(jīng)過離心，取上清液用0.45μm濾膜過濾供液相色譜儀測定，外標(biāo)法定量。

    1.2 試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

    1.2.1 無水乙醇  優(yōu)級(jí)純

    1.2.2 乙醇溶液 50%

    1.2.3 甲醇  HPLC

    1.2.4 鹽酸溶液 1：1

    1 2.5 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯；純度≥99.0%

    1.2.6標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯100mg,用無水乙醇溶解定容至100ml，此溶液濃度為1mg/ml。

    1.2.7標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取上述貯備液10mL，用50%乙醇溶液定容至100mL，此溶液濃度為100μg/mL。再分別吸取0、5、10、15、20mL，用50%乙醇溶液定容至100mL，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為0、5、10、15、20μg/mL。

    1.3  儀器與設(shè)備

    1.3.1  Agilent1100高效液相色譜儀（配有紫外檢測器）

    1.3.2  分析天平，精度為0.1mg

    1.3.3  離心機(jī)

    1.3.4  超聲波水浴鍋

    1.3.5  0.45μm有機(jī)相針式過濾頭

    1.3.6  100mL容量瓶

    1.4  樣品處理

    稱取均勻的樣品5至15克（準(zhǔn)確至0.01g）于100mL容量瓶中，加1mL1：1鹽酸溶液混合，再加入50mL50%乙醇溶液，在超聲波水浴中超聲提取20分鐘，用50%乙醇溶液定容至刻度,搖勻。用一次性注射器抽取一定體積的樣品，用0.45μm有機(jī)相針式過濾頭過濾，濾液供測定用。如樣品為明顯渾濁液體，可用離心機(jī)沉淀后，再過濾測定。

    1.5 儀器條件

    1.5.1 檢測器：紫外檢測器， 260nm波長檢測

    1.5.2 色譜柱：phenomenex Luna 5μm C18(2) 250mm×4.6mm

    1.5.3 流動(dòng)相：A：甲醇；B：0.02mol/L乙酸銨

    1.5.4 流動(dòng)相梯度，見下表

    1.5.5 流速：1.0mL/min

    1.5.6 進(jìn)樣量：20μL

    1.5.7 柱溫：25℃

    2.結(jié)果計(jì)算

    根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。對羥基苯甲酸酯含量按式（1）計(jì)算：

    R=C×V／m……………………（1）

    R—樣品中對羥基苯甲酸酯含量（mg/kg）；

    C—試液中對羥基苯甲酸酯的濃度（μg/mL）；

    V—試液定容體積（mL）；

    m—試樣質(zhì)量（g）。

    3.結(jié)果與討論

    3.1 對羥基苯甲酸酯濃度與其峰面積線性的相關(guān)性

   用1.2.7標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液，按1.5分析條件進(jìn)行測定，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)分別進(jìn)樣三次取平均值。以對羥基苯甲酸酯濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得對羥基苯甲酸乙酯回歸方程為y=0.00896x-0.422，其相關(guān)系數(shù)為0.9998對羥基苯甲酸丙酯回歸方程為y=0.00975x-0.395，其相關(guān)系數(shù)為0.9998。

    3.2分析方法的準(zhǔn)確度（回收率試驗(yàn)）

   稱取10份未添加對羥基苯甲酸酯的飲料樣品約10克，加入不同體積的100μg/mL對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯乙醇標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，定容至100mL，用1.5分析條件做回收率測定，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見下表。

    回收率試驗(yàn)結(jié)果

    3.3 分析方法的精密度

   取含有對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯的飲料樣品10克（準(zhǔn)確至0.01g）10份，按1.4方法進(jìn)行處理，按1.5分析條件測定，平均值分別為132mg/kg、80.9mg/kg，得到對羥基苯甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)偏差（σ）為0.711，變異系數(shù)（RSD）為0.00539；對羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)偏差（σ）為0.489，變異系數(shù)（RSD）為0.00604。

    3.4 實(shí)驗(yàn)室之間的比對結(jié)果

   2006年底,在參加長三角地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品食品檢驗(yàn)?zāi)芰Ρ葘υ囼?yàn)活動(dòng)中,筆者用此方法進(jìn)行對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯項(xiàng)目比對，比對結(jié)論為滿意。